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      9. 色譜柱的清洗和再生

        發布于 2016/05/31閱讀(1462)來源 zxj標簽 色譜柱

        摘要

        各種類型的色譜柱清洗和再生的方法

        內容

        除非特殊說明,在所有情況下,所用溶劑的體積應該是色譜柱體積的 40-60 倍。

        應在清洗過程開始和結束時各測一次柱效和容量因子等,比較色譜柱性能的改善,以確定清

        洗的效果。

        確保色譜柱中沒有樣品和緩沖溶液,清洗前所用的溶劑應與最初清洗時所用的溶劑相溶。

        應確保實驗測試時所用的流動相與色譜柱中最后的溶劑相溶。

        1 正相填料

        用四氫呋喃沖洗。

        用甲醇沖洗。

        用四氫呋喃沖洗。

        二氯甲烷沖洗。

        用無苯正己烷沖洗。

        2 反相填料

        用 HPLC 級水沖洗,沖洗時進 4 等份的 200μl 的二甲亞砜(DMSO)。

        用甲醇沖洗。

        用氯仿沖洗。

        用甲醇沖洗。

        3 陰離子交換填料

        用 HPLC 級水沖洗。

        用甲醇沖洗。

        用氯仿沖洗。
         
        4 陽離子交換填料


        用 HPLC 級水沖洗;在沖洗的過程中進 4 等份 200μl 的 DMSO

        四氫呋喃沖洗。


        5 蛋白質凝膠過濾填料


        去除蛋白質尺寸排阻介質中的污染物有兩種清洗/再生的方法。

        弱保留蛋白質

        用 30moL/L pH3.0 磷酸鹽緩沖液沖洗。

        強保留蛋白質

        用 100%的水到 100%的乙腈梯度洗脫 60min。

        6 多孔石墨化碳

        多孔石墨碳有四種再生的方法,選用哪一種方法依賴于被分析物和所用的溶劑。

        酸堿再生

        適合于使用極性流動相分析離子類分析物。

        將色譜柱倒裝

        用 50ml 含 0.1%三氟乙酸的四氫呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速沖冼。

        用 50ml 含 0.1%三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速沖冼。

        用 50ml 含 0.1%三氟乙酸的四氫呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速沖冼。

        用 95%甲醇水溶液沖洗重新平衡。

        將色譜柱改為正向。

        作者:英國的 R.Plumb-Glaxo

        強有機溶劑再生

        適合于水相分析極性或離子類分析物。

        用 50ml 丙酮以 1ml/min 流速沖洗。

        用 120ml 二丁醚以 1ml/min 流速沖洗。

        用 50ml 丙酮以 1ml/min 流速沖洗。

        用水沖冼至平衡。

        正相再生

        適合于主要使用正相流動相的多孔石墨化碳柱。

        用 50ml 二氯甲烷以 1ml/min 流速沖洗。

        用 50ml 甲醇以 1ml/min 流速沖洗。

        用 50ml 水以 1ml/min 流速沖洗。

        用 50ml 0.1mol/L 鹽酸以 1ml/min 流速沖洗。

        用 50ml 水以流速 1ml/min 沖洗。

        用 50ml 甲醇以 1ml/min 流速沖洗。

        用 50ml 二氯甲烷以 1ml/min 流速沖洗。

        用流動相沖冼至平衡。

         

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