1、色譜柱長(zhǎng)時(shí)間不用，存放時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死（如ACN適于反相色譜柱，正相色譜柱用相應(yīng)的有機(jī)相）
2、對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液時(shí)，要用水沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。
*3、流動(dòng)相使用前必須過(guò)濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長(zhǎng)菌）。
*4、帶seal-wash的1100，要配制90%水+10%異丙醇，以每分2—3滴的速度
虹吸排出，溶劑不能干涸。
5、其它主意事項(xiàng)見(jiàn)說(shuō)明書(shū)，或由現(xiàn)場(chǎng)工程師介紹。
維護(hù)知識(shí)問(wèn)答
1、為什么溶劑和樣品要過(guò)濾?
溶劑和樣品過(guò)濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。
色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。
儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。
樣品過(guò)濾頭的類型：
30mm內(nèi)徑：適用于大進(jìn)樣量的過(guò)濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50μl。
13mm內(nèi)徑：適用于范圍廣的過(guò)濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格,材料為纖維素。
3mm內(nèi)徑：適用于小進(jìn)樣量的過(guò)濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格。處理樣品體積為7μl。
濾膜類型：
聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無(wú)任何可溶物。
醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶液，推薦用于蛋白質(zhì)和其相關(guān)樣品。
尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可用于強(qiáng)酸，
70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。
再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機(jī)溶劑。
2、為什么HPLC用緩沖鹽時(shí)要加在線Seal-wash選項(xiàng)？
HPLC用緩沖鹽時(shí),由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細(xì)小鹽粒非常堅(jiān)硬,它附著在藍(lán)寶石活塞桿上,隨著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運(yùn)動(dòng),容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選項(xiàng)能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結(jié)晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時(shí),必須使用該在線沖洗選項(xiàng).
清洗液配制:90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長(zhǎng)和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。
3、為什么Agilent1100LC的流動(dòng)相管路非常細(xì)?
在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小4~5個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，Agilent1100LC使用加工工藝難度高的毛細(xì)管線作為流動(dòng)相管路。
毛細(xì)管線分類：0.17mm內(nèi)徑------綠色;0.12mm內(nèi)徑-------紅色。
PEEK管線：內(nèi)徑-----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。
毛細(xì)管線優(yōu)點(diǎn):柔韌性好.
***Agilent公司同時(shí)備有1/16in的粗外徑毛細(xì)管線,適用于不同習(xí)慣的用戶,優(yōu)點(diǎn)是剛性好,但柔韌性差一些。
4、流動(dòng)相使用前為什么要脫氣？
流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過(guò)程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無(wú)法分析。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會(huì)造成熒光猝滅。
常用的脫氣方法比較：
氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。
加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。
抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。
超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10-
15min，此法效果最差。
在線真空脫氣法：Agilent1100LC真空脫機(jī)利用膜滲透技術(shù)，在線脫氣，智能控制，無(wú)需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。
5、如何防止溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑過(guò)濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？
溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類的生長(zhǎng)會(huì)堵塞溶劑過(guò)濾器，從而影響泵的運(yùn)行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=4—7）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑過(guò)濾器的堵塞。
A：請(qǐng)嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過(guò)濾。
B：請(qǐng)勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液
C：如果應(yīng)用許可，可在溶劑中加入0.0001---0.001M的疊氮化鈉.
D:在溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣。
E：避免使溶劑瓶暴露在直射陽(yáng)光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。
堵塞后的處理法方法：
將過(guò)濾頭從組件中取下，在濃硝酸（35%）中浸泡1h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。
6、Agilent1100LC泵如何維護(hù)？
Agilent1100LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無(wú)脈動(dòng)、流量準(zhǔn)確的流動(dòng)相，及時(shí)合理的維護(hù)非常重要。
A：流動(dòng)相使用前請(qǐng)必須脫氣、過(guò)濾。
B：使用緩沖鹽時(shí)，要加在線Seal-wash選項(xiàng)。
C：關(guān)機(jī)前，用100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如甲醇），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗]
D：及時(shí)更換PurgeValve內(nèi)的過(guò)濾芯。（當(dāng)打開(kāi)PurgeValve時(shí)，壓力高于10bar，表明過(guò)濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。
7、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？
泵頭活塞的標(biāo)準(zhǔn)密封圈能適合于大多數(shù)應(yīng)用，但使用正相溶劑（如正己烷），不適合使用標(biāo)準(zhǔn)活塞密封圈，特別是長(zhǎng)時(shí)間使用時(shí)，需更換另一種不同的密封圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。（p/n0905-14202/pk）
***注意：聚四氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0—200bar；建議在泵的壓力限制中，將最大壓力設(shè)為200bar。
8、使用梯度比例發(fā)時(shí)要注意那些事項(xiàng)？
當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)，鹽溶液能與有機(jī)溶劑溶液完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒沉淀下來(lái)，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機(jī)溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過(guò)來(lái)，鹽可能落在有機(jī)溶劑中，出現(xiàn)問(wèn)題。
強(qiáng)烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機(jī)溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。
9、在線真空脫氣機(jī)使用要注意那些事項(xiàng)？
一般來(lái)說(shuō)，Agilent1100LC的真空脫氣機(jī)無(wú)需過(guò)多維護(hù)，只需注意幾個(gè)注意事項(xiàng)就可以了。
A：第一次使用，要用隨儀器附帶的注射器抽滿脫氣機(jī)腔體；更換不同類型的溶劑時(shí)，要先抽空，再抽滿。
B：不用的通道要充滿溶劑或密閉起來(lái)。
10、更換色譜柱時(shí)要注意什么事項(xiàng)?
在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小4~5個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，儀器的流動(dòng)相管路連接非常重要,一般Agilent1100LC在第一次安裝時(shí),均有受過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的安裝工程師負(fù)責(zé)安裝,各種接頭會(huì)處理的非常完美。客戶只需在更換色譜柱時(shí)注意接頭處理就可以了，一般柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口為不銹鋼卡套接頭或PEEK管線手?jǐn)Q街頭，當(dāng)完成第一次安張后，不銹鋼卡套已固定死，當(dāng)接不同的柱子時(shí)，要注意柱子接頭處的形狀和長(zhǎng)度，否則會(huì)產(chǎn)生一個(gè)非常大的死體積。
11、手動(dòng)進(jìn)樣閥需做那些維護(hù)，使用時(shí)要注意什么？
對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液后，或者進(jìn)濃度差異比較大的樣品時(shí)要用專用工具而不是用帶針頭的注射器沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。
注意事項(xiàng)：
●安裝時(shí)六通閥的5，6出口要與注射器在同一水平線上，以防止虹吸現(xiàn)象的發(fā)生，導(dǎo)致進(jìn)樣量的重復(fù)性變異。
●進(jìn)樣量的多少要根據(jù)定量管的LOOP體積決定。
當(dāng)樣品量少時(shí)：進(jìn)樣體積由注射器的進(jìn)樣體積決定，但最大進(jìn)樣體積要小于1/2loop體積。
當(dāng)樣品量較多時(shí)：進(jìn)樣體積由定量管的體積決定，為保證樣品完全把定量管的流動(dòng)相置換干凈，需注射5—6倍的LOOP體積。
●C：要使用專用的液相注射器進(jìn)樣，絕對(duì)不可以用氣相的注射器。